客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
膜功能低滲膨脹法（HOST）檢測試劑盒　HECTD1 ELISA Kit　100 ul

DNA吖啶橙（acridine orange）熒光檢測試劑盒　HECTD2 ELISA Kit　300 ul

形態(tài)肖爾（shorr）染色試劑盒　HECTD3 ELISA Kit　100 ul

粒性白細(xì)胞染色試劑盒　HELB ELISA Kit　300 ul

精漿鋅含量比色法定量檢測試劑盒　HDAC5 ELISA Kit　100 ul

精漿果糖含量比色法定量檢測試劑盒　HDAC4(Histone deacetylase 4) ELISA Kit　100 ul

精漿中性α-糖苷酶（α-glucosidase）活性比色法定量檢測試劑盒　HDAC6 ELISA Kit　100 ul

組分氧化應(yīng)激活性氧（ROS）光澤精化學(xué)發(fā)光法定量定量檢測試劑盒　HAUS3 ELISA Kit　100 ul

魚類受精卵細(xì)胞凍存試劑盒（超低溫）　HAX1 ELISA Kit　300 ul

魚類受精卵細(xì)胞凍存試劑盒（低溫）　GYS1 ELISA Kit　100 ul

細(xì)胞頂體酶（acrosin）活性比色法定量試劑盒　H2AFY2 ELISA Kit　100 ul

細(xì)胞銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒　H3F3B ELISA Kit　20 ul

組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒　HABP2 ELISA Kit　300 ul

體液銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒　HACL1 ELISA Kit　100 ul

食物銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒　HBQ1 ELISA Kit　100 ul

環(huán)境銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒　HBS1L ELISA Kit　100 ul
環(huán)紋背帶線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化G氨基丁酸B型受體2抗體NT-3  神經(jīng)營養(yǎng)素-310 ml

酸化G氨基丁酸B型受體2抗體NT-4  神經(jīng)營養(yǎng)素-4100 ul

生長分化因子10抗體（TGF-β超家族10）NAP  中性粒細(xì)胞活化肽100 ul

G蛋白偶聯(lián)受體LOC51210蛋白抗體SCF  干細(xì)胞因子500 ug

細(xì)胞生長抑制蛋白34TPO  血小板生成素500µl

生長激素抗體EPO  促紅細(xì)胞生成素100 ul

GDP甘露糖焦酸化酶抗體CNTF  睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子100 ul

G蛋白偶聯(lián)受體171抗體CTLA-4  細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4100 ul

神經(jīng)細(xì)胞膜糖蛋白M6bCytochrome-C  細(xì)胞色素C500 ug
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。